Peptides作为微流控生物传感平台的捕获剂,在血清中进行多重检测,易于表面功能化和生物偶联。

ty10086 提交于 周三, 08/25/2021 - 15:43
文章英文标题
Easy Surface Functionalization and Bioconjugation of Peptides as Capture Agents of a Microfluidic Biosensing Platform for Multiplex Assay in Serum.
正文
开发复杂基质中蛋白质生物标志物的分析方法是一项艰巨的任务,仍然需要新方法的实施。抗体作为捕获剂在生物测定中得到了广泛的应用,但其稳定性差、生产效率低,以及在多种方法中的交叉反应影响了其更广泛的应用。相反,合成肽,即使具有更高的稳定性和易适应的氨基酸序列,在这个领域仍然基本上没有被开发。在此,我们提供了一种用于直接检测生物标志物过表达的微流控装置的概念证明。多通道微流控聚二甲基硅氧烷( PDMS )器件首先用PAA (聚丙烯酸)溶液进行衍生化。初步检测CRP-1、VEGF- 114、ΦG6肽分别与生物标志物、C反应蛋白( CRP )、血管内皮生长因子( VEGF )、肿瘤坏死因子-α ( TNF-α )结合。然后将每个PDMS微通道分别与特定肽( CRP-1、VEGF-14或ΦG6 )生物偶联,特异性捕获CRP、VEGF和TNF-α。利用这样的微器件,无论是在缓冲溶液中,还是在人血清中,都建立了在纳米范围内具有灵敏度的荧光生物测定方法。所提出的多重检测方法适用于少量样本( 25μL )和检测生物标志物过表达(高于nM浓度),代表了一个无创、廉价的筛选平台。
文章内容(英文)
The development of assays for protein biomarkers in complex matrices is a demanding task that still needs implementation of new approaches. Antibodies as capture agents have been largely used in bioassays but their low stability, low-efficiency production, and cross-reactivity in multiplex approaches impairs their larger applications. Instead, synthetic peptides, even with higher stability and easily adapted amino acid sequences, still remain largely unexplored in this field. Here, we provide a proof-of-concept of a microfluidic device for direct detection of biomarker overexpression. The multichannel microfluidic polydimethylsiloxane (PDMS) device was first derivatized with PAA (poly(acrylic acid)) solution. CRP-1, VEGF-114, and ΦG6 peptides were preliminarily tested to respectively bind the biomarkers, C-reactive protein (CRP), vascular endothelial growth factor (VEGF), and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α). Each PDMS microchannel was then respectively bioconjugated with a specific peptide (CRP-1, VEGF-114, or ΦG6) to specifically capture CRP, VEGF, and TNF-α. With such microdevices, a fluorescence bioassay has been set up with sensitivity in the nanomolar range, both in buffered solution and in human serum. The proposed multiplex assay worked with a low amount of sample (25 μL) and detected biomarker overexpression (above nM concentration), representing a noninvasive and inexpensive screening platform.
来源出处
Journal|[J]Bioconjugate Chemistry2021.
DOI
https://doi.org/10.1021/ACS.BIOCONJCHEM.1C00146

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